E.D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elanský
Oomycete Phytophthora infestans (Mont) de Bary spôsobuje plesnivosť, nebezpečnú chorobu zemiakov a paradajok. Jeden z hlavných zdrojov primárneho inokula P. infestans sú hrubostenné reprodukčné pokojové štruktúry – oospóry.
Hybridné oospóry, ktoré vznikajú krížením geneticky odlišných rodičovských kmeňov, prispievajú k zvyšovaniu genotypovej diverzity v populácii, v dôsledku čoho sa urýchľuje proces adaptácie kmeňov na nové odrody a aplikované fungicídy.
Tvorba oospór P. infestans pozorované v terénnych podmienkach v mnohých krajinách sveta: Rusko (Smirnov et al., 1999), Nórsko (Hermansen et al., 2002), Švédsko (Strömberg et al., 2001), Holandsko (Kessel et al., 2002 ) a ďalšie regióny. Oospóry môžu prežiť v pôde v životaschopnom stave viac ako 2 roky (Bødker et al., 2006) a spôsobiť infekciu rastlín po prezimovaní (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
Predtým sa ukázalo, že listy rastlín rôznych vrstiev zemiakového kríka majú rozdiely v odolnosti voči plesni; zväčšuje sa od spodných listov k horným. Tento trend nezávisí od veku listov, rastlín alebo odrody zemiakov (Vesper et al., 2003). Zároveň sa nám v literatúre nepodarilo nájsť údaje o rozdieloch v intenzite tvorby oospór v listoch rôznych vrstiev kríkov zemiakov. Ak však takéto rozdiely existujú, mali by sa vziať do úvahy pri výbere vzoriek listov na analýzu tvorby oospór a pri interpretácii výsledkov získaných inými autormi. Účelom tejto práce bolo študovať tvorbu oospór v oddelených listoch rôznych vrstiev zemiakovej rastliny umiestnenej v rovnakých podmienkach vlhkých komôr.
Materiály a metódy
V tejto práci bolo použitých 5 izolátov. P. infestans rôzne typy párenia izolované z postihnutých vzoriek privezených z oblastí Moskvy, Riazanu a Leningradu. Z nich sa vybrali 3 páry kmeňov rôznych typov párenia, ktoré pri testovaní v médiu s ovseným agarom produkujú hojné oospóry.
Na testovanie sme použili bezvírusové rastliny zemiaka nasledujúcich odrôd pestovaných v skleníku (v rašelinovom substráte): skorý Sandrin, Zorachka, Uladar, Osiris, stredne skorý Ilyinsky, stredná sezóna Yanka.
Na analýzu sa z rôznych úrovní rastliny zemiaku vybrali jednoduché listy. Tri listy boli vybrané zo spodnej úrovne (4 spodné komplexné listy), tri z vrchu (3-4 komplexné listy navrchu) a tri listy zo stredu kríka. Jednoduché listy sa odvážili, odfotografovali sa na súradnicový papier (na výpočet objemu a plochy) a potom sa položili spodnou stranou nahor na povrch sterilnej vody naliatej do 25 ml Petriho misiek. Ďalej sa každý list infikoval jednou kvapkou zmiešanej suspenzie zoosporangií z párových izolátov Al a A1. Pre tri listy odobraté z každej úrovne sa použilo inokulum z troch rôznych párov izolátov. Jeden list bol infikovaný zmesou inokula z jedného páru izolátov.
Na prípravu suspenzie zoosporangií sa izoláty rôznych typov párenia pestovali na agarovom médiu s ovsenými vločkami počas 7 dní, potom sa zoosporangie zmyli sterilnou destilovanou vodou. Koncentrácia inokula bola 5-7 zoospór na zorné pole mikroskopu pri 80-násobnom zväčšení. Každý list bol infikovaný jednou kvapkou zmiešanej suspenzie zoosporangií z párových izolátov Al a A1.
Vo všetkých experimentoch boli použité 3 zemiakové listy na variant. Po inkubácii počas 20 dní pri 18 °C sa každý list homogenizoval v mažiari s 2 ml destilovanej vody. Zo vzniknutej suspenzie sa odobrali 3 vzorky, z ktorých sa pripravili preparáty na mikroskopovanie.
V každom variante sa skúmalo 180 zorných polí, potom sa prepočítal počet oospór na 1 mm2 povrch listu. Výsledky prieskumu pre každú možnosť boli spriemerované.
Na výpočet intervalu spoľahlivosti (μ) pre hladinu významnosti 0,05 sa použil nasledujúci vzorec
kde s je štandardná odchýlka, n je počet meraní, t je konštanta t-testu pre hladinu významnosti 0,05. Všetky výpočty boli vykonané v Exceli (balík Microsoft Office).
Výsledky a diskusia
Inokulácia listov zozbieraných z rôznych vrstiev zemiakového kríka a umiestnených v rovnakých podmienkach vlhkých komôr odhalila rozdiely v intenzite tvorby oospór. U všetkých študovaných odrôd sa maximálny počet oospór vytvoril pri očkovaní listov zozbieraných z nižších a stredných vrstiev kríka. V dolných a stredných listoch neboli výrazné rozdiely v tvorbe oospór.
Minimálny počet oospór sa vytvoril v listoch horného radu (obr. 1).
V listoch nižších a stredných vrstiev sa maximálny počet oospór vytvoril u odrôd Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar a Osiris. O niečo menej intenzívne sa tvorili v listoch odrody Yanka. Maximálny počet oospór v listoch hornej vrstvy bol pozorovaný v listoch odrody Uladar, za nimi v klesajúcom poradí Zorachka, Osiris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin, avšak nie všetky rozdiely boli štatisticky významné.
Ryža. 1. Tvorba oospór v listoch rôznych vrstiev zemiakového kríka. Spodné sú listy troch spodných úrovní kríka, horné sú 3-4 zložité listy z vrcholu rastliny, stredné sú zo stredu kríka.
Chybové úsečky označujú interval spoľahlivosti na hladine významnosti 0,05.
V teréne tvorbu oospór v spodných a stredných listoch kríka uľahčujú aj mikroklimatické podmienky: vyššia vlhkosť vzduchu, znížené slnečné žiarenie a denné kolísanie teplôt (Harrison, 1992). Pri postreku zhora sa do spodnej a strednej časti kríka dostane menej pesticídov. Na zníženie tvorby oospór by sa mali používať technológie, ktoré umožňujú úspešné dodávanie fungicídov do spodnej a strednej časti kríka. Dobré výsledky možno dosiahnuť použitím postrekovačov s turbulentným prúdením vzduchu a systémových fungicídov, ktoré sa môžu šíriť do neošetrených častí kríkov.
Táto práca bola podporená Ruskou vedeckou nadáciou (projekt č. 14-50-00029).
Článok bol publikovaný v časopise „Potato Protection“ (č. 2, 2015)